水质微生物检测取样要求（微生物检测方法的选择）

现有的微生物检测方法主要针对水系统中的浮游微生物，以浮游微生物的数量来反映水系统中微生物控制是否处于稳定和良好的状态。检测结果仅代表取样时水系统中浮游微生物的数量，并不能完全反映水系统中微生物的污染程度。因此，需要基于风险制定微生物监测方案，对水系统中的微生物数量和类群进行持续监测，根据趋势变化情况评估水系统的运行状态。

1.水质微生物检测取样要求

建立适当的取样方案对于制药用水的质量控制十分关键。取样方案应经过验证。取样点应具有足够代表性，能够覆盖关键的控制点、所有的使用点以及潜在的最差情况。不同取样点的取样频率应基于风险评估和验证数据设定。一般来说，取样方案应覆盖所有分配系统的循环管路，关注循环管路中的代表点和风险点，如送水点和回水点。典型的取样方案是对各个水点进行轮流取样，尽可能达到时间和空间的平均分配。

制药用水的微生物监测可分为过程控制（process control）和质量控制（quality control）两种目的。过程控制监测的目的是确认制药用水的制备、分配系统运行是否稳定且处于受控状态，质量控制监测的目的是确认所使用的制药用水质量是否符合要求。过程控制监测取样时，取样点设置应尽可能覆盖整个系统，以反映系统的运行状态，并在出现问题时确定具体位置。过程控制监测取样可使用专用取样接口、取样前冲洗，避免操作、取样口引入的污染，尽可能反映管道内制药用水中浮游微生物的污染水平。质量控制监测取样则应尽量在使用点进行，取样过程尽可能与实际用水时保持一致，以获得实际用水时的真实微生物污染水平。

取样应有详细的操作规范，取样人员应经过培训和考核。取样应使用无菌容器，并注意取样后转运和保存过程中容器的密封性。如使用外接管取样，应在取样后立即拆除。取样时应记录取样人、取样时间、取样点、取样量等信息。取样量应能够满足检验需求。取样后应尽快进行检验（一般在2小时内），若不能立即检验，则应置于2～8℃保存，保存时间一般在12小时内，最多不超过24小时。不能满足上述条件时需要进行风险评估。

2.微生物检测方法的选择

水系统中能够存活的微生物主要以能够形成生物被膜的革兰阴性菌为主，这类细菌对碳源利用广泛，对营养要求低，因此一般更适合在寡营养的培养基（例如R2A琼脂培养基）中生长，最适生长温度一般不超过35℃，部分微生物生长缓慢。因此，制药用水（通则0261）中推荐的微生物检测方法为经薄膜过滤法处理，采用R2A琼脂培养基，30～35℃培养不少于5天。

由于不同制药用水系统中的微生物类群存在差异，使用不同的计数方法、培养基、培养温度和培养时间可能会影响检出微生物数量和种类。例如，慢生根瘤菌使用薄膜过滤法检测时，菌落较小不易观察，需培养7天或更长时间，如水系统中存在该菌，使用平皿法更有助于观察计数。因此，药品生产企业可根据自身水系统中微生物类群的特点在制药用水（通则0261）推荐检测方法的基础上进行适当调整。一般情况下，选择在较短时间内可检出较多微生物数量和种类的检测方法，并需要对所使用的方法进行验证，以证明所选用的方法优于或等同于药典推荐方法。

若日常监测结果均为小于1cfu或计数水平较低，可考虑增加检验量，以获取更多水系统中的微生物数量和种类信息，反映水系统中的微生物水平和变化趋势。

为更快速地获得检测结果，及时发现和处理不良趋势，药品生产企业可选择快速微生物检测方法进行制药用水的微生物监测，包括在线的微生物检测方法